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固相萃取仪基本操作四步走介绍

来源:技术文章    发布时间:2021-06-15    浏览:275次
   固相萃取仪(SPE)是近年发展起来一种样品预处理技术,由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来,主要用于样品的分离、纯化和浓缩,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率,更有效的将分析物与干扰组分分离,减少样品预处理过程,操作简单、省时、省力。广泛用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。
  固相萃取仪操作“四步走”规定:
  1.活化
  萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml溶剂冲洗滤膜使SPE填料保持湿润,因为填料干燥会降低样品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也会影响回收率的重现性。先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料,因为甲醇能润湿吸附剂表面,并渗透到非极性的硅胶键合相中,使硅胶更容易被水润湿;然后再加入水或缓冲液冲洗,创造和样品溶剂相容的环境并提高回收率。
  2.上样
  ①用0.1mol/L酸或碱调节,使pH=9,离心取上层液萃取;
  ②用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液,以水或缓冲液稀释后萃取;
  ③用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液,调节pH值后萃取;
  ④超声15min后加入水、缓冲液,取上清液萃取。流速应控制为1ml/min,流速快不利于待测物与固定相结合。
  3.淋洗
  反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液,可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH值。加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积,而SPE滤膜为5-10ml。
  4.洗脱
  应选用5-10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度,则可先将洗脱液挥干后,再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水,可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC分析柱如C18柱分析洗脱物。
  若待测物可电离,可调节pH值,抑制样品离子化,以增强待测物在反相SPE填料中的保留,洗脱时调节pH值使其离子化并用较弱的溶剂洗脱,收集洗脱液后再调节pH值使其在HPLC分析中达到理想分离效果。在洗脱过程中应减慢流速,用两次小体积洗脱代替一次大体积洗脱,回收率更高。
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